百合斑驳病毒CP与Cl基因的融合表达、多抗制备及其应用

摘要：

采用RT-PCR方法从甘肃地区引种的切花百合上克隆了百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因与细胞质内含体(cytoplasmic inclusions,Cl)基因的3'端600 bp片段,连接到原核表达载体pET-28a(+)上.构建了融合表达的重组质粒pET-28a-CP-CL200.重组质粒转化大肠杆菌BL21成功表达了融合蛋白CP-C1200.经镍柱亲和层析获得纯化的融合蛋白,进一步用其免疫家兔制备了多克隆抗体.Western Blot结果显示,该多抗与感染LMoV的百合叶片中的病毒CP与CI均发生特异性反应,而对健康百合叶片无反应.用该多抗建立双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测百合叶片样品,相对于RT-PCR方法其灵敏度和特异性均达到了93.3%.研究结果为快速、准确检测百合斑驳病毒的试剂盒研制奠定了基础.

关键词：百合斑驳病毒、外壳蛋白、细胞质内含体、抗体、DAS-ELISA、病毒检测

所属期刊栏目：40

分类号：S432.4(病虫害及其防治)

资助基金：中国科学院科技支甘工程专项KJZG-2008-3;中国科学院重要方向性项目KSCX2-YW-N-44-07

在线出版日期：2010-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：475-481