降解赤霉病菌毒素Tri101基因的原核表达及抗体制备
采用RT-PCR方法克隆了编码禾谷镰刀菌单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶Tri101基因的cDNA序列,并连接到原核表达载体pGEX-4T2上,将获得的重组载体pGEX4T2/Tri101转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE和Western blot分析表明,经IPTG诱导后,Tri101基因在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,融合蛋白GST-Tri101分子量为75.45 kDa.将该融合蛋白切胶纯化后免疫家兔,制备兔抗GST-Tri101多克隆抗体.经ELISA法测定抗体效价大于1:256 000.Western blot分析表明制备的抗体与原核细胞体外表达的Tri101蛋白可以特异性结合,表明该抗体的特异性良好.应用该抗体验证了感赤霉病小麦中Tri101基因的表达.兔抗GST-Tri101抗体的成功制备,为进一步研究Tri101的生物学功能、细胞定位以及在其它植物中的表达等奠定了基础.
Tri101基因、原核表达、多克隆抗体、Western blot
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S432.1(病虫害及其防治)
国家自然科学基金项目30771439;农业部948项目2008-Z22
2010-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
469-474
