大麦条纹花叶病毒中国株CP基因克隆分析、原核表达及抗血清制备

摘要：

首次用PCR方法,自大麦条纹花叶病毒中国株(BSMV-CH)的RNA2(GenBank登录号为:AY789694,未报道)中扩增出外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并亚克隆到pMD18-T载体上进行测序分析.结果表明BSMV-CH的CP全长597bp,它与BSMV其它株系CP的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为93.1%～93.8%和91.4%～92.4%;与同属的早熟禾半潜病毒(PSLV)和剪秋罗环斑病毒(LRSV)的核苷酸同源性分别为53.0%和41.8%,氨基酸同源性分别为48.1%和40.0%.根据大麦病毒属病毒已经报道的CP氨基酸序列绘制系统发育树,分析表明分离的各毒株在进化上存在明显地理位置的相关性.把CP基因亚克隆到GST融合表达载体pEGX-6p-1上,优化IPTG诱导终浓度后,在37℃IPTG终浓度为1.0 mmol/L时,融合蛋白GST-CP在大肠杆菌BL21中得到了特异表达.12%SDS-PAGE表明,表达产物大小为48.5kDa,主要以包含体形式存在.对蛋白进行定量后,用冰冷的KCl显色,分离表达的蛋白质特异条带制备抗原,免疫家兔得到抗血清,酶联法(enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA)测定的抗血清效价为1/6 400.用抗血清对感病大麦和健康大麦进行检测,结果表明抗血清有很高特异性.

关键词：大麦条纹花叶病毒、外壳蛋白、系统发育树、融合蛋白、抗血清

所属期刊栏目：36

分类号：S4(植物保护)

资助基金：西北农林科技大学校科研和教改项目

在线出版日期：2007-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：397-403