甘薯潜隐病毒莲藕分离物辅助成分蛋白酶基因原核表达及抗血清制备

摘要：

根据已报道的甘薯潜隐病毒莲藕分离物sweet potato latent virus-lotus(SPLV-lotus)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR从感病莲藕样品中扩增获得SPLV-lotus辅助成分-蛋白酶基因(HC-Pro),大小为1 375 bp.通过序列测定和分析后,将其克隆到原核表达载体pGEX4T-1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导并纯化获得大小为74 kD的融合蛋白pGEX4T-1-HC-ProSPLV-lotus.SDS-PAGE结果显示,融合蛋白获得过量表达.以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清,采用ELISA和Western blot对抗血清效价和特异性进行检测,当HC-Pro抗血清稀释比为1 ∶256 000时,ELISA显色后()D450读数仍高于0.6,表明所制备抗血清合格;Western blot结果显示,在感染SPLV-lotus植株样品中仍能检测到单一目的条带.这些结果表明,制备的抗血清效价合格且可用于SPLV-lotus的特异性检测.

关键词：甘薯潜隐病毒莲藕分离物、辅助成分-蛋白酶、原核表达、抗血清

所属期刊栏目：48

分类号：S436.32(病虫害及其防治)

资助基金：江苏省自然科学基金;中央本级重大增减支项目;国家特色蔬菜产业技术体系项目

在线出版日期：2022-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：319-325