向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立

摘要：

向日葵黑茎病菌是向日葵上的一种毁灭性真菌,是我国的植物检疫性有害生物.为了准确快速检测向日葵黑茎病菌,本研究根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异,设计特异性RPA引物和CRISPR-Cas12a crRNA,建立了 RPA等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a检测的快速检测方法.通过条件优化,RPA/CRISPR-Cas12a检测体系在37℃恒温条件下,RPA反应30 min,CRISPR/Cas12a反应20 min,即可特异性检测向日葵黑茎病菌.荧光法检测灵敏度与实时荧光PCR的灵敏度相当,最低检测量为0.1 pg,试纸条法检测最低检测量为1 pg.由于试纸条检测结果可用肉眼观察,快速便携,操作简单,更适合用于田间和口岸的向日葵黑茎病菌快速早期检测;而荧光检测灵敏度高,对环境要求高,更适合用于实验室检测.

关键词：向日葵黑茎病菌、RPA、CRISPR-Cas12a、荧光检测、侧向流层析试纸条

所属期刊栏目：48

分类号：S435.655(病虫害及其防治)

资助基金：国家重点研发计划;国家重点研发计划;中国检验检疫科学研究院基本科研业务费

在线出版日期：2022-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：69-76,89