地衣芽胞杆菌HS10原生质电转化体系的研究

摘要：

地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis HS10及其粗蛋白对多种病原真菌具有防治效果,为挖掘其生防功能基因,本研究通过对原生质体的制备、再生培养基、渗透压稳定剂、电击参数等试验条件进行优化,建立了地衣芽胞杆菌HS10原生质体电转化法.结果表明最佳转化条件为:转接培养10 h达到对数生长后期的菌体,浓缩4倍后,利用终浓度1 mg/mL的溶菌酶,于37℃、150 r/min酶解20 min,酶解效率达到99.34%,1×SMM洗涤3次,调整菌浓度至1.0×108cfu/mL,并通过1.6 kV、5 ms的电击后,迅速在SMMP溶液中100 r/min、37℃恢复6~10 h,涂布于含Kan和Erm的再生培养基DM3平板.将该方法用于突变体库构建的质粒pMarA(8253 bp)和基因敲除质粒pMADΔCP(13043 bp)的大片段质粒转化,分别获得了37 cfu/μg DNA和10 cfu/μg DNA阳性转化子.该遗传转化体系为地衣芽胞杆菌HS10中相关基因功能的研究提供了技术支撑.

关键词：地衣芽胞杆菌、原生质体、电转化、质粒

所属期刊栏目：44

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31571992,31371925

在线出版日期：2018-06-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：117-123