一种改进的尖孢镰刀菌的实时荧光定量PCR检测方法

摘要：

为实现荧光定量PCR对土壤病原真菌数量更为高效、灵敏的检测,本研究将液体培养的孢子悬浮液和长年耕作的水稻土制作成孢子浓度为4×101～4×106 spore/g的带菌土,采用MoBio PowerSoil@DNA Isolation Kit提取模拟带菌土壤总DNA,引入常规PCR预扩增包含qPCR目标序列的1 446 bp片段,以预PCR产物为模板进行qPCR,构建荧光定量PCR标准曲线.研究结果表明:以试剂盒提取的带菌土壤总DNA为模板绘制的qPCR标准曲线相关系数r为0.985,检测下限为4×103 spore/g土;引入预PCR后,qPCR标准曲线相关系数r为0.974,检测下限为4×102 spore/g土,较未引入时提高了10倍,结合不同土壤病原真菌的特异性引物,该检测方法可为土壤病原真菌的有效定量检测提供技术支撑.

关键词：实时荧光定量PCR、土壤病原真菌、尖孢镰刀菌、检测下限

所属期刊栏目：43

分类号：S436.68;S154.3(病虫害及其防治)

资助基金：公益性行业农业科研专项201503110-03

在线出版日期：2017-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：129-133,144