美国白蛾hcapn3基因的克隆及 HcAPN3蛋白与Cry1Ac 结合特性分析

摘要：

通过比对分析已知昆虫氨肽酶 N（aminopeptidase N，APN）氨基酸序列并结合本实验室的美国白蛾（Hyphantria cunea ）中肠 iTRAQ 结果，设计了 hcapn3基因特异引物，获得 hcapn3基因片段。通过 RACE-PCR 技术获得美国白蛾中肠氨肽酶 N 基因（hcapn3）全长序列（GenBank 登录号为 KJ013598）。Blastp 分析表明，获得的氨肽酶属于氨肽酶 N3家族，命名为 HcAPN3。序列分析显示 HcAPN3包括952个氨基酸残基，具有典型的谷氨酸锌化氨肽酶（Gluzincin）结构域和羧基端（ERAP1 C）结构域。利用 Bac to Bac 表达系统在昆虫细胞中表达108 kDa 的HcAPN3蛋白。在原核表达系统中表达58 kDa 的 Gluzincin 结构域和49 kDa ERAP1 C 的结构域蛋白。Ligand Blot 分析结果显示，HcAPN3蛋白及 Gluzincin 结构域可与 Cry1Ac 蛋白特异性结合，但 ERAP1 C 结构域未能与Cry1Ac 结合。本研究首次克隆了美国白蛾氨肽酶基因并分析了 HcAPN3与 Cry1Ac 的结合特性，为下一步功能研究提供基础。

关键词：美国白蛾、氨肽酶 N、HcAPN3、Gluzincin 结构域、Ligand Blot 分析

所属期刊栏目：42

分类号：S433.4;S763.3(病虫害及其防治)

资助基金：国家现代农业产业技术体系CARS 14；国家自然科学基金34711775；北京农学院促进人才培养综合改革专项计划BNRC＆CC201404

在线出版日期：2016-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：62-67