一个CRISPR/Cas9-VQR基因编辑系统的构建
CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于细菌、酵母、动物和植物中的基因组定点编辑技术,但该编辑系统的使用范围受PAM(proto-spacer-motif)位点NGG的限制.本研究通过突变Streptococcus pyogenes Cas9(SpCas9)编码氨基酸(1135位的天冬氨酸D突变成缬氨酸V,1335位的精氨酸R突变为谷胱氨酸Q,1337位的苏氨酸T突变为精氨酸R,命名该突变子为Cas9-VQR)改造其识别PAM为NGA的位点以扩大其使用范围.并使用玉米Ubi启动子启动Cas9-VQR基因、优化SpCas9的密码子、加入保守的核定位信号序列、增加单子叶植物中保守的3′UTR序列和使用水稻U6启动子启动gRNA来修饰该编辑系统.结果表明Cas9-VQR系统能够识别PAM为NGA的位点,并进行有效的切割.体外酶切活性检测结果表明Cas9-VQR的切割效率为5％～70％.水稻转化检测结果表明Cas9-VQR的切割效率约为27.5％～70.5％,平均切割效率为46.23％.本研究拓宽了CRISPR/Cas9系统在作物中的使用范围,特别是NGA PAM位点较高的作物.
CRISPR/Cas9-VQR、定点突变、PAM、基因突变
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国家转基因生物新品种培育重大专项2016ZX08009-001
2019-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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