碱胁迫相关基因GsWRKY15的克隆及其转基因苜蓿的耐碱性分析
WRKY蛋白属于锌指型转录调控因子,能够参与植物多种逆境响应.本研究利用前期野生大豆盐碱胁迫RNA-seq测序数据,从构建的碱胁迫基因调控网络中筛选并克隆到GsWRKY15基因.分析GsWRKY15在碱胁迫下野生大豆根中的表达模式,发现该基因受碱胁迫诱导显著上调表达,且在胁迫后1 h表达量最高.分析GsWRKY15基因在野生大豆各组织中的表达特异性,发现该基因在各组织中均有表达,花中表达量最高.采用根癌农杆菌侵染苜蓿子叶节方法,将GsWRKY15转化肇东苜蓿,获得39株抗性植株.通过PCR、Southern blot和RT-PCR方法分析抗性植株,获得了超量表达GsWRKY15基因的转基因株系并对其进行了耐碱性分析.在150 mmol L–1 NaHCO3处理2周后转基因苜蓿生长状态良好,而非转基因苜蓿出现萎蔫、变黄,甚至死亡;非转基因苜蓿的相对质膜透性和丙二醛含量显著高于转基因苜蓿,而叶绿素含量显著低于转基因苜蓿;同时分析碱胁迫下转基因植株中胁迫相关基因的表达模式,发现H+-Ppase、NADP-ME、KIN1、RD29A基因的表达量高于非转基因苜蓿.结果表明GsWRKY15基因的超量表达能够显著增强苜蓿的耐碱能力.
野生大豆、GsWRKY15、肇东苜蓿、农杆菌、耐碱性
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S56;R3
国家自然科学基金项目31171578;黑龙江省高校科技创新团队建设计划项目2011TD005;东北农业大学学科团队建设项目团队1资助. This study was supported by the National Natural Science Foundation of China31171578;Heilongjiang Provincial Science and Technology Innovation Team Building Program for Universities2011TD005;the Northeast Agricultural University Discipline Team Construction ProjectGroup 1
2017-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
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