基于FLUOstar平台的小麦dsDNA荧光定量与基因型分析

摘要：

双链DNA(dsDNA)定量分析是植物分子生物学研究的基础,对基因型分析尤为重要.本研究以 λ 噬菌体dsDNA为标准样品,建立了荧光定量标准曲线,探讨荧光核酸定量通量性及其与紫外法定量的差异,并分析荧光染料在基因分型中的应用.结果表明,荧光染料能够对dsDNA进行高效微量定量分析(<1.1 ngμL-1),但因鉴定核酸的浓度较低,对小麦籽粒和叶片全基因组DNA定量时稀释倍数较大,易增大浓度误差.降低反应体系量导致标准曲线决定系数降低,影响测量准确性.精确定量dsDNA浓度时,总反应体系应大于200μL;对PCR产物进行基因分型时,总反应体系应不低于40μL.相同DNA模板浓度下,FLUOstar平台可以对抗秆锈病基因显性标记csSr32#1(Sr32)和IB-267(Sr50)的PCR产物进行基因型分型,判断准确率为100%.对特异性强且等位基因片段差异大(≥100 bp)的共显性标记,如抗叶锈病基因标记We173(Yr26)等,用荧光染料同样可以进行基因分型.与琼脂糖凝胶电泳相比,荧光染料鉴定等位基因价格略高,但方法简单、准确快速、重现性好,可用于分子育种中世代材料快速筛选.

关键词：普通小麦、dsDNA、荧光定量、显性标记、分子育种

所属期刊栏目：43

分类号：R73;S

资助基金：国家重点研发计划项目2016YFD0101804-6;国家自然科学基金项目31671691;国家科技支撑计划项目2014BAD01B05;科技部国际合作项目2013DFG30530资助.This study was supported by the Key Project of the National Research and Development Program2016YFD0101804-6;the National Natural Science Foundation of China31671691;the National Key Technology R&D Program of China2014BAD01B05;the International Science & Technology Cooperation Program of Ministry of Science and Technology2013DFG30530

在线出版日期：2017-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：947-953