结球甘蓝雌蕊发育调控因子SPT与HEC1的基因克隆及相互作用
为研究SPT和HEC及其相互作用对甘蓝雌蕊发育的影响,以结球甘蓝自交不亲和系E1为材料,提取雌蕊总RNA,根据拟南芥中SPT和HEC1基因设计引物,采用同源克隆方法克隆SPT基因,其序列1085 bp,开放阅读框(ORF) 1062 bp; HEC1基因ORF 696 bp.通过cDNA推导得到的氨基酸序列表明,SPT编码353个氨基酸残基,预测分子量为37.67kD,pI为6.83; HEC1编码231个氨基酸残基,预测分子量为25.26 kD,pI为10.2.两基因在各器官中均表达,但SPT在果实和雌蕊中表达量最高,而HEC1在根和花蕾中的表达量最高.为检测两者的相互作用,构建原核表达质粒pCold I-SPT和pGEX-HEC1,pull-down试验表明两蛋白能够在体外相互作用.同时构建pGBKT7-SPT、pGADT7-HEC1及互换载体pGBKT7-HEC1和pGADT7-SPT酵母表达载体,分别转化酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后均未出现自激活和毒性现象,融合后的二倍体酵母均能在S D/-Trp-Leu-Ade-His/X-t-gal/AbA板上长出蓝色菌斑,表明SPT和HEC1能够相互作用激活下游的HIS3、AUR1-C、MEL1和ADE2报告基因,酵母双杂交试验结果与Pull-down检测一致,说明SPT和HEC1能够相互作用以调控雌蕊的发育.
结球甘蓝、雌蕊、SPT、HEC1、相互作用、酵母双杂交
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S66;S64
国家自然科学基金项目31071802,31000908;重庆市自然科学基金重点项目2011BA1002;中央高校基本科研业务费专项XDJK2012B020;国家重点基础研究发展计划973计划项目2012CB113900
2014-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
1011-1019
