胍基化修饰结合稀土金属标记应用于蛋白质相对定量研究

摘要：

稀土金属元素标记技术利用双功能试剂二乙三胺五乙酸双酸酐(DTPA双酸酐)将稀土金属元素和目标肽段连接起来作为质量标签,结合基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析实现蛋白质的相对定量研究.为进一步提高标记效率,本研究对反应体系温度、pH值、反应时间和金属标签过量倍数等进行优化,并结合胍基化修饰技术封闭蛋白质酶切肽段中的侧链ε-氨基,使标记反应只发生在末端氨基,提高标记选择性.标准蛋白质实验结果表明,所有酶切肽段胍基化反应效率均大于95%,且胍基化修饰反应对金属标记效率没有影响.对于选定的7个标准蛋白质而言,每个蛋白质都至少有3个肽段可以得到良好的标记结果.对于离子抑制效应带来的干扰,可通过标准曲线进行校正,结果表明,当两种金属离子浓度比小于6时,该效应对蛋白质相对定量没有影响.胍基化修饰结合稀土金属标记方法不仅能在肽段水平实现相对定量,而且能在蛋白质水平实现相对定量.

关键词：稀土金属标签、胍基化修饰、蛋白质定量

所属期刊栏目：31

分类号：O657.63(分析化学)

资助基金："973"项目2006CB910801,2006CB910803;"重大新药创制"科技重大专项2009ZX09301-002;国家自然科学基金创新研究群体科学基金项目30621063

在线出版日期：2011-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：283-290