海南斑等蝎钾通道阻断剂 Im58的克隆、表达、纯化和鉴定

摘要：

　　为表达钾离子通道阻断剂Im58,设计了4条搭桥 PCR 引物,通过 overlap PCR 的方法扩增出蝎毒肽 Im58 DNA全长片段,选用表达载体pGEX-4T-1,将测序正确的克隆转化至大肠杆菌 E. coli/Rosetta(DE3)中.通过检测不同诱导时间和IPTG浓度下融合蛋白的表达量,筛选出最优表达条件.表达蛋白经 IPTG 诱导后,融合蛋白再经GSH亲和层析柱纯化,将洗脱液经超滤浓缩脱盐、纯化后得GST-Im58融合蛋白,蛋白用小肠激酶酶切后通过 RP-HPLC C18柱分离获得色谱纯的蝎毒肽.蝎毒肽通过 Tricine 系统的 SDS-PAGE 蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量大小和纯度,并由 MALDI-TOF-MS 来精确测定重组多肽的分子量.结果表明：Im58阳性克隆子证明成功构建了Im58原核表达载体,Tricine 系统的 SDS-PAGE 蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS鉴定Im58多肽表达纯化成功.

关键词：钾离子通道阻断剂、Im58、原核表达、蛋白纯化

分类号：TQ464.9;Q784

资助基金：国家自然科学基金资助项目30900239;广东省产学研资助项目2010B090400047

在线出版日期：2013-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：36-40