川黔紫薇LeAGL11基因克隆表达分析及转录自激活检测

摘要：

[目的]探究转录因子AGL11 在紫薇属紫薇自交及川黔紫薇与紫薇杂交过程中不同时间的差异性表达及其在酵母中的转录自激活特性,为研究紫薇远缘杂交结实率低的分子机制奠定基础.[方法]以'紫韵'紫薇自交授粉和'紫韵'紫薇×'川黔1 号'川黔紫薇杂交授粉后 24、48 和 72 h的雌蕊为材料,克隆LeAGL11基因,通过生物信息学分析其理化性质等,采用实时荧光定量方法分析该基因在不同授粉方式和不同阶段的相对表达量,通过DNA重组技术构建LeAGL11 的酵母表达载体,转化至Y2HGold感受态细胞内进行转录自激活检测.[结果]从川黔紫薇中克隆得到LeAGL11 基因,该基因的编码序列长 666 bp,编码 221 个氨基酸,LeAGL11 蛋白无信号肽和跨膜结构域,不属于膜蛋白,属于亲水性蛋白.氨基酸序列比对和进化树分析显示其与紫薇、石榴和葡萄的AGL11 蛋白都有较高的相似度;蛋白质结构预测和序列分析表明其具有MADS-box基因家族中典型的MADS-box和K-box保守结构域.实时荧光定量试验分析不同阶段的相对表达量表明LeAGL11 基因在杂交后呈现出上调的趋势,在自交后呈现出先下调后上调的趋势,在自交授粉24 h时相对表达量最高,自激活检测发现pGBKT7-LeAGL11 重组质粒在缺色氨酸的培养基中生长,在SD/-Trp+AbA+X-α-gal培养基中没有发生颜色变化.[结论]LeAGL11 基因在紫薇自交过程及川黔紫薇和紫薇杂交过程中的相对表达量具有一定的差异性,且LeAGL11 无转录自激活活性,可用于后续试验.

关键词：紫薇属、远缘杂交、AGL11、基因克隆、基因表达

所属期刊栏目：44

分类号：S718.46(林业基础科学)

资助基金：湖南省自然科学基金项目;湖南省科技创新计划项目;长沙市杰出创新青年培养计划

在线出版日期：2024-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：197-206