绿色木霉内切葡聚糖酶基因EgⅦ的克隆及其表达

摘要：

[目的]在枯草芽孢杆菌中表达绿色木霉(Trichodoma vivide,T.viride)内切葡聚糖酶基因EgⅦ.研究内切葡聚糖酶基因EgⅦ的生物信息、基因克隆与表达及重组酶学性质.[方法]提取纤维素酶生产菌株绿色木霉AS3.3711的总RNA,通过反转录合成cDNA,并以之为模板利用PCR技术扩增获得内切葡聚糖酶基因EgⅦ,并进行生物信息学分析;构建了重组表达载体pMA5-EgⅦ,并利用热激转化法将其转入枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,B.subtilis)WB600感受态细胞中,成功进行表达.[结果]生物信息学分析表明,内切葡聚糖酶基因EgⅦ编码249个氨基酸,蛋白质的分子量为26.8002 KD,理论等电点7.62,属于胞外蛋白;预测蛋白质三级结构与二级结构一致,由ɑ-螺旋、延伸链区、β-转角和无规则卷曲构成.电泳结果表示,重组枯草芽孢杆菌在EgⅦ基因片段大小符合处出现条带,表明成功将EgⅦ-pMA5转化到B.subtilis WB600中.刚果红染色结果显示重组枯草芽孢杆菌在CMC培养基上出现较大直径的透明圈,重组菌株上清粗酶液DNS酶活力达到22.71 U/mL,表明绿色木霉内切葡聚糖酶基因EgⅦ可以在枯草芽孢杆菌中表达,并具有较高活性.重组酶酶学性质分析表明,该酶的最适温度是60℃,最适pH值为6.4,且温度在50℃以下,pH值在5.6～8.0范围内,酶活力具有良好的稳定性.[结论]通过对内切葡聚糖酶基因EgⅦ克隆及分析,获得了表达内切葡聚糖酶基因EgⅦ的枯草芽孢杆菌基因工程菌,了解了重组酶酶学性质,为纤维素酶的广泛应用提供了理论基础.

关键词：绿色木霉、内切葡聚糖酶、克隆、枯草芽孢杆菌、酶学性质

所属期刊栏目：42

分类号：S718.52+1.3(林业基础科学)

资助基金：黑龙江省揭榜挂帅科技攻关项目;黑龙江省揭榜挂帅科技攻关项目

在线出版日期：2022-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：169-177