毛竹不同组织总RNA提取质量的比较

摘要：

[目的]探讨适合于毛竹不同组织尤其是毛竹根系以及种子等总RNA提取的最优方法,获得高质量RNA样品,为今后开展毛竹的分子生物学研究奠定理论基础.[方法]分别采用柱式Trizol法、Trizol法、SDS法、改良CTAB法提取毛竹的细根、气雾根、成熟叶、幼叶、枝、种子、笋等不同组织的RNA,通过NanoDrop 2000微量分光光度计检测浓度、1.5％琼脂糖凝胶电泳检测样品完整度以及RT-PCR检测是否存在目标条带,采用Excel和SPSS软件对提取结果进行统计学分析.[结果]4种方法均能从毛竹不同组织中提取到总RNA,其中SDS法提取的RNA浓度较高,但提取时间过长且步骤繁琐,RNA容易发生降解,其质量不适合用于后续的分子生物学试验;柱式Trizol法和Trizol法用时短且提取方法简单便捷,除了对毛竹细根和种子的提取效果不佳外,其余组织的RNA纯度和质量都可以满足后续的试验开展;改良CTAB法适用于各组织,包括木质化程度较高的毛竹细根以及富含淀粉的毛竹种子,缺点是DNA残留明显.除SDS法所获得的浓度较高并与其他3种方法有显著性差异外,其余3种RNA抽提方法对样品总RNA浓度无统计学差异,且各组织RNA反转录为cDNA,以内参基因PhPP2A为目的基因进行RT-PCR扩增,均可在目标位置获得明亮单一条带,约为150 bp.[结论]改良CTAB法最适合毛竹细根以及种子的RNA提取,柱式Trizol法和Trizol法适合毛竹气雾根、叶、枝和笋总RNA的提取.

关键词：毛竹;组织;RNA提取;RT-PCR

所属期刊栏目：41

分类号：S718.43(林业基础科学)

资助基金：国家自然科学基金青年项目;丽水市科技局重点研发项目;中央财政林业科技推广示范资金项目;浙江省自然科学基金面上项目

在线出版日期：2021-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：157-165