野生小果油茶ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要：

为建立一个具有良好稳定性和可重复性的野生小果油茶ISSR-PCR反应体系，以提取的野生小果油茶总DNA为供试材料，利用单因素试验，正交试验设计L16（45）和方差分析对DNA模板的量,引物浓度，dNTPs浓度， Mg2＋浓度，Taq DNA聚合酶的量5个影响ISSR-PCR反应体系的因素进行优化研究。确定野生小果油茶ISSR-PCR最优反应体系为：在20μL的反应体系中，DNA模板为30 ng，引物浓度为0.7μmol/L，dNTPs浓度为0.25 mmol/L，Mg2+浓度为2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶的量为1.75 U。方差分析结果表明，5个因素对体系的影响均未达到显著水平，其中引物浓度对反应体系影响最大。应用建立的体系对5份野生小果油茶样品进行扩增，证明了该体系具有稳定性和可重复性。

关键词：野生小果油茶、ISSR-PCR、单因素实验、正交试验设计

分类号：S794.4(森林树种)

资助基金：“生物化学与分子生物学”校级重点学科基金066

在线出版日期：2014-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：36-42,49