美洲黑杨木质素合成关键基因的克隆及反义表达载体的构建

摘要：

以美洲黑杨Populus deltoides新萌叶片为材料,通过自行设计引物,用RT-PCR的方法克隆了美洲黑杨木质素合成关键基因4CL和CAD基因部分序列.测序结果表明:这两个基因片段长度分别为859 bp和493 bp.此外,人工合成了4CL基因木质部特异表达启动子4CLp,长度为1 180 bp.分别用限制性内切酶Hind Ⅲ/BamH Ⅰ、BamH Ⅰ/Sma Ⅰ和Sma Ⅰ/Sac Ⅰ对4CLp、4CL和CAD基因序列进行双酶切,同时用Hind Ⅲ/Sac Ⅰ对pBI121表达载体进行双酶切,回收了目的片段.酶切回收后用T4DNA连接酶克隆到植物表达载体pBI121中,并转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α.经质粒PCR和双酶切分析,确定获得了pBI-4CLp-a4CL-aCAD反义植物表达载体.

关键词：生物科学与技术、美洲黑杨、木质素合成、关键基因、克隆技术、反义表达载体

所属期刊栏目：30

分类号：S722.5(造林学、林木育种及造林技术)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2011-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：77-82