桉树ISSR-PCR反应体系的建立及优化

摘要：

模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+的浓度,Taq DNA聚合酶的用量以及退火温度是影响简单序列重复区间扩增(ISSR-PCR)结果的主要因素.以桉树叶片基因组DNA为试材,系统地测试了这6个因素对桉树ISSR反应结果的影响.结果表明;最优化的反应体系即20μL反应体系中,含20 ng模板DNA、0.4 μmol·L-1随机引物、0.15 mmol·L-1 dNTPs,2.0 mmol·L-1Mg2+、1.25 U Taq DNA聚合酶.最佳退火温度为55℃;PCR反应程序为94 ℃预变性5 min; 94 C变性45 s,55 ℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,35个循环;72℃再延伸7 min.

关键词：分子生物学、桉树、叶片基因组DNA、ISSR-PCR、优化

所属期刊栏目：28

分类号：S792.39;Q291(森林树种)

资助基金：湖南省长沙市科技基金K069083-22

在线出版日期：2008-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：44-48