肾透明细胞癌中miRNA-224-5p靶向NEDD4L调控轴的识别与研究

摘要：

目的:基于生物信息学方法筛选肾透明细胞癌关键基因，识别可能的微RNA（miRNA）-mRNA作用轴，探讨相关基因在肾透明细胞癌组织和细胞中的表达。方法:选取基因表达综合（GEO）数据库基因表达谱GSE40435、GSE71302数据集，肾透明细胞癌TCGA-KIRC数据集来自癌症基因组图谱（TCGA）数据库。采用R软件筛选差异表达的mRNA和miRNA，并对mRNA进行功能富集分析。采用STRING数据库和Cytoscape软件进行蛋白质互作分析。采用Oncomir数据库筛选预后相关的差异表达miRNA。采用TargetScan和miRDB靶基因预测工具筛选miRNA可能调控的靶基因。收集2021年6月至12月山西医科大学第一医院收治的34例肾透明细胞癌患者的组织样本及临床资料，并选择正常肾细胞株293T和肾透明细胞癌细胞株786O。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测基因的相对表达量；蛋白质印迹法、免疫组织化学染色法检测目的蛋白的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证基因间的靶向关系。结果:差异分析筛选得到1 351个差异表达mRNA和50个差异表达miRNA。功能富集分析提示肾透明细胞癌中脂肪酸代谢、异生物质代谢等途径被抑制，细胞凋亡、免疫应答途径被激活。蛋白质互作分析提示肾透明细胞癌中信号转导、蛋白泛素化等途径起到关键作用。筛选结果显示miRNA-224-5p（miR-224-5p）与肾透明细胞癌进展关系最紧密，且在肿瘤组织中高表达，其预后相关靶基因为NEDD4L。肾透明细胞癌组织与癌旁组织的NEDD4L mRNA相对表达量分别为0.138±0.103、1.000±0.026（
t＝46.23，
P<0.05）；miR-224-5p相对表达量分别为1.000±0.043、0.129±0.108（
t＝45.28，
P<0.05）。不同分级及分期肾透明细胞癌组织NEDD4L mRNA、miR-224-5p的表达差异均有统计学意义（均
P<0.05）。NEDD4L蛋白在肾透明细胞癌中表达降低。293T与786O细胞中NEDD4L基因相对表达量分别为1.000±0.125、0.210±0.044 （
t＝17.52，
P<0.05）；miR-224-5p基因相对表达量分别为0.209±0.049、1.000±0.234（
t＝10.609，
P<0.05）。转染后的293T细胞样本中，miRNA模拟物组与阴性对照组的NEDD4L mRNA相对表达量分别为0.236±0.062、1.000±0.024，差异有统计学意义（
t＝43.56，
P<0.05）。NEDD4L蛋白在miRNA模拟物组中表达降低。双荧光素酶报告基因实验提示NEDD4L是miR-224-5p的直接靶基因。
结论:在肾透明细胞癌中，miR-224-5p靶向调节NEDD4L表达，这一机制可能与肾透明细胞癌的发生、发展有关。

关键词：肾肿瘤、微RNAs、泛素蛋白连接酶类、预后

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资助基金：山西省"1331工程"重点创新团队建设计划3c332019001;山西省回国留学人员科研资助项目2021-160;山西省研究生教育创新项目2022Y380;"1331 Project" Key Innovation Team Building Program of Shanxi Province3c332019001;Returned Overseas Students Scientific Research Funding Project of Shanxi Province2021-160;Graduate Education Innovation Project of Shanxi Province2022Y380

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：104-110