DNA损伤特异性结合蛋白1在肝癌组织中的表达及其对SMMC-7721细胞同源重组修复、靶向杀伤作用的影响

摘要：

目的:探讨DNA损伤修复因子DNA损伤特异性结合蛋白1（DDB1）在肝癌组织中的表达情况及DDB1基因沉默对人肝癌SMMC-7721细胞DNA损伤修复和靶向杀伤作用的影响。方法:利用UALCAN平台对癌症基因组图谱（TCGA）数据库中肝细胞肝癌组织（371例）和癌旁组织（50例）中DDB1的表达情况及DDB1表达与肝癌患者总生存的相关性进行生物信息学分析。向SMMC-7721细胞转染靶向DDB1的小干扰RNA（siRNA）和阴性对照siRNA，分别为DDB1沉默组和阴性对照组。用X线照射诱导两组细胞外源性DNA双链断裂（DSB）损伤，采用免疫荧光染色（γH2AX用于评估DSB损伤情况，RPA32s33和Rad51用于评估同源重组修复情况）和蛋白质印迹法（检测RPA32s33蛋白水平）分析DDB1基因沉默对细胞DSB损伤修复的影响。采用姐妹染色体交换（SCE）实验分析DDB1沉默组和阴性对照组细胞同源重组SCE频率。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析PARP抑制剂奥拉帕尼（10 μmol/L）、顺铂（1 μg/ml）及二者联合杀伤DDB1沉默组和阴性对照组SMMC-7721细胞的效果。结果:生物信息学分析发现，肝癌组织DDB1 mRNA水平较癌旁组织高（
P<0.001），DDB1高表达患者总生存较DDB1低表达患者差（
P=0.029）。X线照射后培养24 h，阴性对照组细胞γH2AX灶点已大多消退，DDB1沉默组细胞仍较多[每个细胞中（5.1±2.0）个比（13.4±2.0）个，
t=-5.08，
P=0.007]。X线照射后培养4 h，阴性对照组RPA32s33灶点数[每个细胞中（30.8±5.0）个比（13.2±1.6）个]和Rad51灶点数[每个细胞中（19.5±1.8）个比（8.3±3.3）个]均高于DDB1沉默组，两组间差异均有统计学意义（均
P<0.01）。阴性对照组SCE频率高于DDB1沉默组[（21.2±3.0）%比（11.2±1.6）%，
t=5.07，
P=0.007]。MTT法检测显示，奥拉帕尼作用后，DDB1沉默组细胞的存活率低于阴性对照组[（40.3±3.6）%比（79.8±1.3）%，
t=17.94，
P<0.001]，奥拉帕尼联合顺铂时，两组细胞存活率均进一步降低，且DDB1沉默组细胞存活率低于阴性对照组[（10.2±2.8）%比（29.6±3.4）%，
t=7.72，
P=0.002]，顺铂单独作用时，DDB1沉默组和阴性对照组细胞存活率差异无统计学意义[（41.9±5.1）%比（49.8±3.3）%，
t=2.71，
P=0.054]。
结论:DDB1在肝癌组织中高表达，可能是肝癌治疗抵抗和预后较差的重要因素。敲低DDB1基因表达能促进肝癌SMMC-7721细胞对PARP抑制剂的敏感性，其机制很可能与DDB1沉默引起SMMC-7721细胞的同源重组修复缺陷有关。

关键词：癌，肝细胞、DNA损伤、同源重组、DNA损伤特异性结合蛋白1、聚ADP核糖聚合酶抑制剂

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在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：561-568