10.3760/cma.j.cn115355-20200702-00355
淫羊藿素调控miRNA-329和miRNA-1236抑制肝癌细胞增殖的机制研究
目的:探讨淫羊藿素调控miRNA-329(miR-329)、miRNA-1236(miR-1236)抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法:采用2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素处理肝癌细胞株HepG2,对照组仅加入二甲基亚砜(DMSO),培养36 h后采用CCK-8法检测淫羊藿素对HepG2细胞的半数抑制浓度(
IC50)及细胞增殖率。使用400 μg/L甲胎蛋白(AFP)处理HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h后,CCK-8法检测AFP对HepG2细胞增殖的影响。构建AFP-3'UTR荧光素酶报告质粒pmirGLO-AFP-3'UTR质粒,将pmirGLO空白载体质粒、pmirGLO-AFP-3'UTR质粒及miR-329或miR-1236的模拟物或抑制剂、相应的模拟物的对照质粒(NC)、相应的抑制剂的对照质粒(INC)分别共转染HepG2细胞,培养24 h后双荧光素酶报告基因检测miR-329和miR-1236对荧光素酶活性的影响。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测淫羊藿素对HepG2细胞AFP、miR-329和miR-1236表达的影响。使用miR-329、miR-1236的模拟物和抑制剂分别转染HepG2细胞,检测miR-329、miR-1236对AFP水平的影响。
结果:2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组细胞增殖率分别为(80.4±2.3)%、(73.2±1.6)%、(51.7±3.3)%、(38.2±4.6)%、(29.5±4.3)%和(94.0±2.9)%,差异有统计学意义(
F=75.65,
P<0.01);不同浓度淫羊藿素组HepG2细胞增殖率分别与对照组比较,差异均有统计学意义(均
P<0.01)。淫羊藿素对HepG2细胞的
IC50为10 μmol/L。2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组AFP mRNA的相对表达量分别为0.83±0.06、0.69±0.02、0.53±0.07、0.45±0.01、0.33±0.07和1.00±0.01,差异有统计学意义(
F=42.67,
P<0.01);不同浓度淫羊藿素组AFP mRNA的相对表达量分别与对照组比较,差异均有统计学意义(均
P<0.01)。400 μg/L AFP作用HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h,细胞增殖率分别为(102±5)%、(138±13)%、(186±24)%、(260±12)%、(311±15)%、(348±25)%,差异有统计学意义(
F=27.483,
P<0.01);AFP作用不同时间分别与0 h细胞增殖率比较,差异均有统计学意义(均
P<0.01)。与对照组比较,不同浓度淫羊藿素均能够促进miR-329和miR-1236表达(均
P<0.01)。miR-329和miR-1236模拟物与AFP-3'UTR共转染后,荧光素酶活性均降低了约40%;miR-329、miR-1236抑制剂与AFP-3'UTR共转染后,荧光素酶活性均增加约1.5倍。miR-329和miR-1236均可降低AFP蛋白和mRNA的表达水平(均
P<0.05)。
结论:淫羊藿素体外通过增加miR-329和miR-1236表达,促进miR-329、miR-1236与AFP-3'UTR的结合,抑制AFP mRNA的稳定性和翻译活性,抑制AFP表达,从而抑制肝癌细胞增殖。
肝肿瘤、微RNAs、淫羊藿素、细胞增殖
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国家自然科学基金青年基金82003809;北京医院博士启动基金BJ-2019-148;National Natural Science Foundation of China for Youths82003809;Beijing Hospital Doctoral Scholars FoundationBJ-2019-148
2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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