肝癌中肿瘤相关成纤维细胞的分离、培养、鉴定及其对肝癌细胞生物学功能的影响

摘要：

目的 建立肝癌肿瘤相关成纤维细胞(CAF)分离、培养体系,并予以鉴定,同时进一步探讨CAF对肝癌细胞生物学功能的影响.方法 肝细胞癌(HCC)术后患者的肿瘤组织通过胶原酶消化、离心、重悬等技术手段,分离、纯化CAF.分别通过形态学观察及免疫荧光技术对CAF进行鉴定.在此基础上将分离鉴定的CAF与肝癌细胞株Huh7、HepG2进行共培养,建立CAF与肝癌细胞株体外共培养系统,同时利用CCK-8实验观察CAF对Huh7、HepG2细胞增殖的影响;利用Transwell实验分析CAF对Huh7、HepG2细胞侵袭能力的影响.结果 分离、培养成功的CAF形态学表现为长梭状或纺锤状,细胞体积与细胞核较其他细胞明显偏大.免疫荧光结果显示CAF特殊标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白均呈强阳性,并主要表现为胞膜染色.而肝癌细胞表面的特殊标志物甲胎蛋白(AFP)及血管内皮细胞表面特殊标志物CD31均阴性.Huh7、HepG2的增殖和侵袭能力明显增强.其中CAF与Huh7和HepG2细胞共培养24 h后,空白组与实验组中的细胞增殖率分别为(63±4)%、(78±5)%和(69±5)%、(81±3)%,差异均有统计学意义(均P<0.05).CAF增强Huh7和HepG2穿膜能力,空白组与实验组中的穿膜细胞数目分别为(59.4±3.1)、(162.9±3.9)个和(104.8±2.6)、(166.4±4.2)个,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 HCC患者肿瘤组织中分离、培养的细胞为CAF.CAF形态结构及蛋白表达等具有特异性,并促进肝癌细胞的增殖和侵袭.

关键词：成纤维细胞、肝肿瘤、平滑肌肌球蛋白、细胞增殖、肿瘤侵润

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分类号：R73;R65

资助基金：国家重大科学研究计划S973计划2013CB910500;国家重点基础研究发展计划973计划2014CB542101National Key Scientific Research Program of China S973 Program2013CB910500;National Basic Research Program of China 973 Program2014CB542101

在线出版日期：2017-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：505-509