小干扰 RNA 沉默人乳头瘤病毒16E6基因对子宫颈癌 SiHa 细胞系中 E-钙黏蛋白表达及高甲基化的影响

摘要：

目的：研究小干扰 RNA（siRNA）沉默人乳头瘤病毒（HPV）16E6基因对子宫颈癌 SiHa细胞系中 E-钙黏蛋白（E-cad）表达及其基因启动子区高甲基化的影响。方法运用以慢病毒为载体质粒的 siRNA 沉默子宫颈癌 SiHa 细胞系中 HPV16E6基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法及蛋白质印迹法（Western blot）分别检测沉默后 SiHa 细胞中 HPV16E6 mRNA 表达水平、E-cad mRNA及蛋白表达水平。用甲基化特异性 PCR（MSP）法检测 SiHa 细胞系中 E-cad 基因（CDH1）启动子区甲基化情况。结果 siRNA E6组、空载体组、空白对照组 E-cad mRNA 相对表达量分别为4.755±1.085、1.224±0.840、1.327±1.221，蛋白相对表达量分别为0.616±0.019、0.325±0.016、0.299±0.015，其中siRNA E6组 SiHa 细胞中 E-cad mRNA 及蛋白相对表达量明显高于另两组，差异均有统计学意义（F＝21.346，P＜0.01；F＝323.398，P＜0.01），而空载体组和空白对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。与HPV16E6基因沉默前 E-cad 完全甲基化状态相比较，沉默后 E-cad 基因甲基化扩增产物呈弱阳性，其强度较空载体组及空白对照组明显减弱，而非甲基化扩增呈阳性。结论 HPV16E6基因沉默可使子宫颈癌SiHa 细胞中 E-cad 表达上调，同时能够降低 CDH1基因启动子区高甲基化水平，可能在一定程度上扭转CDH1基因启动子区的高甲基化状态，引起 E-cad 重新表达。

关键词：钙黏着糖蛋白类、人乳头瘤病毒 16E6、甲基化、小干扰 RNA、子宫颈肿瘤、SiHa 细胞系

所属期刊栏目：28

分类号：R73;TM7

资助基金：湖南省科技厅课题2013FJ3129；湖南省自然科学基金联合项目14JJ7090Fund program:Project of Science and Technology Commission of Hunan Province of China2013FJ3129;Natural Science Foundation of Hunan Province of China14JJ7090

在线出版日期：2016-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6-10,20