分化抑制因子基因沉默的人尤文肉瘤细胞系的建立

摘要：

目的 应用短发夹RNA(shRNA)技术,构建分化抑制因子(Id2)基因稳定干扰的人尤文肉瘤细胞系,为进一步研究Id2在尤文肉瘤细胞生长、分化中的作用提供有用模型.方法 体外合成3条Id2序列特异性shRNA,构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-Id2真核表达载体,通过脂质体转染尤文肉瘤RD-ES细胞,采用Western blot方法检测Id2蛋白表达水平,采用细胞计数法检测shRNA转染后对细胞生长的影响,采用流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化.结果 Western blot结果显示,稳定转染shRNA-Id2-543及shRNA-Id2-593的RD-ES细胞中Id2表达水平降低,与对照组相比分别下降54％及57％;转染组细胞的生长速度明显减慢,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期S期细胞比例分别为(36.60±1.53)％及(44.89±2.46)％,高于对照组的(29.73±2.03)％,差异有统计学意义(P＜0.05),G2期比例无明显变化甚至降低.结论 成功建立Id2基因沉默的人尤文肉瘤RD-ES稳定转染细胞系.Id2表达下调可抑制尤文肉瘤细胞增殖,细胞周期阻滞于S期.Id2可能在尤文肉瘤细胞生长增殖中扮演重要角色.

关键词：Id2基因、shRNA、尤文肉瘤细胞、稳定转染

所属期刊栏目：27

分类号：R735.7;R3;R969

资助基金：国家自然科学基金;北京市自然科学基金

在线出版日期：2015-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：305-309