Notch信号通路体外介导肺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂获得性耐药的分子机制研究

摘要：

目的 研究Notch信号通路在肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用机制.方法 选用EGFR 19号外显子缺失突变(DelE746-A750)的人肺癌PC9细胞株以及吉非替尼获得性耐药PC9/AB2细胞株.构建靶向Notch-1的siRNA真核表达载体,转染PC9/AB2细胞.DNA直接测序法检测EGFR基因20号外显子,荧光原位杂交试验(FISH)检测Met基因扩增.Western blot实验检测EGFR、Akt和Erk蛋白、Notch受体和配体、转化生长因子β(TGF-β)受体以及上皮间质标志物E-Cadherin、Vimentin和Snail表达水平.CCK-8法测定吉非替尼对PC9和PC9/AB2细胞的增殖抑制作用.结果 DNA直接测序法和FISH检测排除吉非替尼耐药株PC9/AB2存在T790M突变和MET扩增.Western blot检测显示PC9/AB2细胞中Notch-1表达较原代PC9细胞明显增强;其余Notch受体、配体和TGF-β受体无差异.PC9/AB2细胞上皮细胞性标志物E-Cadherin表达较PC9细胞明显下调,间质细胞性标志物Vimentin和Snail的表达较PC9明显上调.Notch-1 RNA干扰后PC9/AB2细胞Notch-1减弱,E-Cadherin表达上调,Vimentin和Snail表达明显下调.Notch-1RNA干扰后PC9/AB2细胞由细长梭形重新转变为类上皮细胞的鹅卵石形.RNA干扰下调Notch-1表达可部分逆转PC9/AB2细胞对吉非替尼耐药性、减弱锚定-不依赖性生长能力.结论 Notch-1活化在吉非替尼获得性耐药过程中起一定作用,抑制Notch-1表达可部分逆转吉非替尼获得性耐药.

关键词：Notch、表皮生长因子受体、耐药、上皮-间质转型

所属期刊栏目：27

分类号：R734.2;R285.5;R563

资助基金：国家自然科学基金;广东省自然科学基金

在线出版日期：2015-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：298-304