肿瘤干细胞表面标志物CD133单链抗体基因的分离与鉴定

摘要：

目的 分离、构建和表达抗人CD133单链抗体(scFvCD133),测定其生物学活性.方法 用抗体工程技术从抗人CD133单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞中分离抗体可变区基因(VL和VH),测定DNA序列并确定抗体互补决定区(CDR);将scFv CD133基因克隆至pET32a中,转化Origami菌株,IPTG诱导,Ni2+-NTA His树脂纯化单链抗体,梯度硫氰酸盐洗脱法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测其亲和性和特异性.结果 scFvCD133基因VL和VH长度分别为339 bp和342 bp,各编码113和114个氨基酸,其中VL隶属于小鼠Ig κ轻链,VH隶属于小鼠Ig重链Ⅰ亚类.scFvCD133经SDS-PAGE和Western blot 分析证明相对分子质量为27 × 103,体外实验具有一定的亲和性和特异性.结论 获得scFv CD133基因,为CD+133肿瘤干细胞的靶向治疗奠定了基础.

关键词：肿瘤干细胞、单克隆抗体、免疫学技术

所属期刊栏目：23

分类号：R73(肿瘤学)

在线出版日期：2011-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：230-233,246