10.11735/j.issn.1671-170X.2023.05.B008
ENO1缺失诱导胶质母细胞瘤细胞NCOA4介导的铁死亡的机制研究
[目的]探究ENO1通过NCOA4对胶质母细胞瘤(GBM)细胞铁死亡的调节机制.[方法]qRT-PCR和Western blot检测GBM组织和正常组织中ENO1的表达.人GBM细胞系U251细胞分为对照组、si-ENO1-NC 组、si-ENO1-1 组、si-ENO1-2 组、si-ENO1+si-NCOA4-NC 组、si-ENO1+si-NCOA4 组,分别转染siRNA-ENO1-NC、siRNA-ENO1、siRNA-NCOA4-NC 或 siRNA-NCOA4 序列,qRT-PCR 和 Western blot 验证ENO1或NCOA4的表达;Western blot检测铁蛋白重多肽1(FTH1)蛋白表达;MTT法分析U251细胞增殖能力;试剂盒检测U251细胞ROS、MDA、Fe2+含量及线粒体膜电位;透射电镜观察线粒体形态;PI染色检测U251细胞死亡率.[结果]与正常组织相比,GBM组织中ENO1 mRNA和蛋白表达较高(P<0.05).与对照组和si-ENO1-NC组相比,转染si-ENO1可降低ENO1 mRNA和蛋白表达、FTH1蛋白表达以及24、48、72 h的细胞增殖活力(24 h OD 值:0.35±0.05 vs 0.48±0.09,0.35±0.05 vs 0.50±0.08;48 h OD 值:0.56±0.07 vs 0.98±0.13,0.56±0.07 vs 1.05±0.10;72 h OD 值:0.69±0.08 vs 1.35±0.14,0.69±0.08 vs 1.38±0.11)、红/绿荧光比值(3.46±0.79 vs 11.14±1.53,3.46±0.79 vs 10.97±1.82)(P<0.05),增加 ROS(7.13±0.69 vs 1.00±0.12,7.13± 0.69 vs 0.97±0.16)、MDA(5.61±0.53 vs 1.85±0.26,5.61±0.53 vs 1.83±0.42)、Fe2+含量(6.79±0.78 vs 2.41± 0.32,6.79±0.78 vs 2.46±0.47)、细胞死亡率(25.48±3.17 vs 7.31±0.84,25.48±3.17 vs 7.24±1.02)、NCOA4 mRNA和蛋白表达(P均<0.05),si-ENO1的上述作用均可被si-NCOA4逆转.[结论]ENO1缺失可上调NCOA4表达,降低FTH1蛋白水平,进而促进ROS、MDA及铁释放,诱导GBM细胞铁死亡.
胶质母细胞瘤、α-烯醇化酶、核受体共激活因子4、铁死亡、铁蛋白重多肽1
29
R737.9;R730.52(肿瘤学)
四川省医学科研课题项目S21031
2023-08-07(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共7页
394-400