靶向cortactin基因的shRNA重组质粒的构建和筛选

摘要：

目的 构建靶向cortactin基因的shRNA重组质粒,并筛选出沉默cortactin基因效果最明显的shRNA重组质粒.方法 设计并合成3对针对cortactin基因不同位点的shRNA片段,构建相应的重组质粒(命名为pBSilence1.1-cortactin-shRNA 1-3),并进行酶切鉴定和测序分析.通过脂质体转染方法将各重组质粒及阴性对照质粒分别转染至人肝癌HepG2细胞中,转染24 h后荧光显微镜下观察各组细胞的转染情况,并采用RT-PCR检测各组细胞mRNA的表达情况.结果 构建的重组质粒经酶切鉴定与测序分析证实完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,3组重组质粒组HepG2细胞的cortactin基因mRNA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).与pBSilence 1.1-cortactin-shRNA1和pBSilence1.1-cortactin-shRNA2两组相比,pBSilence 1.1-cortactin-shRNA3组的cortactin基因mRNA表达降低更加显著(P＜0.05).结论 成功构建并筛选的重组质粒能有效抑制HepG2细胞中cortactin基因mRNA表达,为下一步研究沉默cortactin基因对肝癌细胞生物学行为的影响提供了实验基础.

关键词：Cortactin、短发夹状RNA、RNA干扰、肝癌

所属期刊栏目：42

分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：南通市卫生局青年科研基金项目WQ2014004

在线出版日期：2015-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：984-987