人生存素基因的克隆、表达与抗血清制备

摘要：

目的 克隆表达重组人生存素,制备其抗血清并检测其免疫识别活性.方法 用RT-PCR方法从培养的人白血病细胞株HL-60中克隆人生存素cDNA,克隆到原核表达载体pET32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,目的蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后免疫小鼠制备抗血清,ELISA检测抗血清的效价,Western blot和免疫细胞化学法鉴定抗血清的特异性.结果 所克隆生存素cDNA序列与Genbank中序列完全一致,将其读码框插入原核表达载体pET32a(+)诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析证实重组蛋白为分子量约37KD的融合蛋白,表达量占总茵体的30%,纯化后融合蛋白的纯度为95%,所制备的鼠抗血清的效价达1:1 600,Westem blotting证实其有较好的特异性,可以检测肿瘤细胞生存素的表达.结论 我们已克隆并表达了人生存素基因,所制备的抗人生存素血清可用于相关肿瘤检测.

关键词：生存素、抗血清、融合蛋白

所属期刊栏目：35

分类号：R730.4(肿瘤学)

资助基金：四川省科技厅资助项目2002A071

在线出版日期：2008-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：240-243