全人源食管癌单链抗体scFv基因文库的构建

摘要：

目的 制备全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库.方法 取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源,提取总RNA,用RT-PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库.首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对,以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段,再以它们为模板分别扩增VH-linker与VL-linker,用SOE-PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ,胶回收PCR产物获得scFv.将scFv基因克隆入噬菌粒裁体pCANTAB-5E后电转入Ecoli TG1.PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物.结果 食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带;VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp.PCR连接产物的转化效率为2×107 cfu/μg,scFv的阳性插入率为91.7%(22/24).结论 食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础.

关键词：噬菌体抗体库、单链抗体、食管癌、基因工程抗体

所属期刊栏目：34

分类号：R735.1(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30370422;重庆市自然科学基金CSTC.2006BB5297

在线出版日期：2007-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：486-489