SMAD1通过调控miR-32表达影响结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移

摘要：

目的:研究SMAD家族成员 1(SMAD family member 1,SMAD1)通过调控微RNA(microRNA,miRNA,miR)-32 对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、凋亡和迁移等生物学行为的影响,并探讨可能的作用机制.方法:实时荧光定量PCR法检测SMAD1 在CRC细胞HCT-8、HCT-116 和HT-29 以及正常结肠上皮细胞株NCM460 中的表达水平.采用脂质体法分别将特异性针对SMAD1 基因的siRNA(siSMAD1)和siRNA-阴性对照(negative control,NC)(siNC)转染至人CRC细胞HCT-116 中,用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测沉默效果.分别采用CCK-8 法、FCM法、划痕愈合实验和Transwell小室实验检测沉默SMAD1 表达对细胞增殖、凋亡和迁移的影响;实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测沉默SMAD1 表达对HCT-116 细胞中miR-32 及其宿主基因TMEM245 及靶基因PTEN表达的影响;实时荧光定量PCR法检测上皮-间质转化相关因子波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)mRNA的表达水平.采用染色质免疫共沉淀法检测SMAD1是否能直接与TMEM245/miR-32 的启动子区相结合.分别将miR-32-模拟物(miR-32-mimics)以及阴性对照-模拟物(NC-mimics)转入HCT-116 细胞,采用实时荧光定量PCR法检测转染效率和SMAD1 的表达水平.分别同时共转染siSMAD1+miR-32-mimics以及siSMAD1+NC-mimics至HCT-116 细胞,采用CCK-8 法、FCM法、划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测共转染后细胞增殖、凋亡和迁移能力的改变,实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测转染后对PTEN和上皮-间质转化相关因子表达的影响.结果:CRC细胞HCT-8、HCT-116 和HT-29 中SMAD1 mRNA的表达水平均高于正常结肠上皮细胞株NCM460 细胞(P均＜0.05).siSMAD1转入HCT-116 细胞后,HCT-116 细胞中SMAD1 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(P均＜0.05).沉默SMAD1 基因表达后,HCT-116 细胞的增殖和迁移能力均被抑制,而凋亡率明显增加(P均＜0.05),miR-32 和TMEM245 mRNA的表达水平下调,PTEN mRNA和蛋白表达水平上调(P均＜0.05),Vimentin和N-cadherin mRNA的表达下调,E-cadherin mRNA表达上调(P均＜0.05).染色质免疫共沉淀结果显示,SMAD1 能与TMEM245/miR-32 核心启动子区相结合(P＜0.05).与siSMAD1+NC-mimics共转染组相比,siSMAD1+miR-32-mimics共转染组细胞增殖、迁移能力增强,凋亡率减少,PTEN蛋白表达水平下调,Vimentin和N-cadherin mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA表达下调(P均＜0.05).结论:沉默SMAD1 表达可通过下调miR-32 表达来上调PTEN的表达水平,进而抑制CRC细胞的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡.

关键词：结直肠肿瘤、SMAD1基因、微RNA、细胞增殖、细胞凋亡、细胞迁移

所属期刊栏目：42

分类号：R735.3;R392.11;R285.5

资助基金：广东省自然科学基金项目;湛江市科技发展专项资金竞争性分配项目;广东医科大学学科建设类项目;广东省普通高校特色创新项目

在线出版日期：2023-06-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共16页

页码：77-92