Caspase-1/GSDMD介导的经典细胞焦亡在紫杉醇诱导的鼻咽癌细胞死亡中的作用

摘要：

目的:探讨细胞焦亡在紫杉醇诱导的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞死亡中的作用,及可能的分子作用机制.方法:采用紫杉醇处理NPC细胞HNE-2和5-8F,光学显微镜下观察紫杉醇对细胞形态学的影响,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验检测对HNE-2和5-8F细胞的毒性作用,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测对HNE-2和5-8F细胞中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18释放水平的影响,FCM法检测对HNE-2和5-8F细胞中焦亡效应分子Caspase-1活性和细胞膜膜孔形成水平的影响,同时采用蛋白质印迹法检测细胞焦亡关键效应分子Caspase-1、人Gasdermin D蛋白(GSDMD)-全长(full length,FL)和GSDMD-N端片段表达水平的变化,以观察紫杉醇是否可以诱导NPC细胞发生细胞焦亡.随后,予以Caspase-1特异性抑制剂Z-YVAD-FMK和细胞焦亡抑制剂甘氨酸预处理HNE-2和5-8F细胞,再用LDH释放实验、ELISA法、FCM法以及蛋白质印迹法检测对紫杉醇诱导的HNE-2和5-8F细胞发生焦亡的影响.结果:紫杉醇可以诱导HNE-2和5-8F细胞发生细胞焦亡形态学改变,紫杉醇处理HNE-2和5-8F细胞后LDH释放量明显增加(P均<0.01),IL-1β 和IL-18的释放量均明显增加(P均<0.05);FLICA 660-YVAD-FMK和SYTOX1 Green双阳性细胞所占的比例较对照组明显著增加(P均<0.001),提示紫杉醇诱导了细胞焦亡;蛋白质印迹法结果进一步提示,紫杉醇处理的HNE-2和5-8F细胞中,经典焦亡中的关键效应分子的Caspase-1、GSDMD-FL蛋白和GSDMD-N端片段和IL-1β蛋白表达明显上调(P均<0.001).Caspase-1特异性抑制剂Z-YVAD-FMK和细胞焦亡抑制剂甘氨酸都可以阻断上述紫杉醇诱导的经典细胞焦亡途径(P均<0.05).结论:紫杉醇可以诱导NPC细胞通过经典途径发生细胞焦亡.

关键词：鼻咽癌、紫杉醇、细胞焦亡、Caspase-1、GSDMD

所属期刊栏目：41

分类号：R739.63;R361.3;R979.1

资助基金：国家自然科学基金;湖南省自然科学基金

在线出版日期：2022-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：475-486