喉鳞状细胞癌进展中FOXP4和miR-4476协同调控表达的临床意义

摘要：

目的:检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-4476在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及人喉癌细胞系中的表达水平,以及其对喉癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响,并检测miR-4476与转录因子叉头框蛋白4(fork head box protein 4,FOXP4)的相关性及可能的结合位点.方法:应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学SP法检测LSCC组织及其相应癌旁正常组织中FOXP4 mRNA和蛋白的表达情况.应用在线网站预测与FOXP4有调控作用的miRNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-4476在LSCC组织与其相应癌旁正常组织及4种人喉癌细胞系中的表达情况,并检测其与FOXP4表达的相关性.采用染色体免疫共沉淀技术检测FOXP4与miR-4476启动子区的结合情况.将pcDNA3.1-FOXP4与报告基因载体pGL3-miR-4476启动子区共转染至293T细胞中,通过检测荧光素酶报告基因荧光信号活性分析FOXP4对miR-4476启动子区的影响.将miR-4476模拟物及抑制物分别转染人喉癌TU177和AMC-HN-8细胞,用实时荧光定量PCR法检测转染效率,然后采用MTS实验、细胞克隆形成实验、Transwell小室迁移及侵袭实验分别检测miR-4476表达调控对喉癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响.结果:在LSCC组织中FOXP4 mRNA的表达水平(P＜0.05)及蛋白阳性表达率(P＜0.01)均高于正常组织,且蛋白表达阳性率与肿瘤的淋巴结转移和TNM分期相关(P值均＜0.05).LSCC组织中miR-4476表达水平明显高于癌旁正常组织(P＜0.01),与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移相关(P值均＜0.05).LSCC组织中miR-4476与FOXP4的表达呈正相关(R=0.455,P＜0.01),而且FOXP4与miR-4476的启动子区结合(P＜0.01),可能具有促进miR-4476启动子活性的作用(P＜0.01).喉癌细胞中miR-4476表达均高于对照组(P＜0.05),转染miR-4476模拟物后TU177细胞中miR-4476表达水平明显升高(P＜0.01),而转染miR-44 76抑制物后AMC-HN-8细胞中miR-4476表达水平明显降低(P＜0.05).与对照组相比,转染miR-4476模拟物可增强喉癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P值均＜ 0.01),转染miR-4476抑制物可减弱喉癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P值均＜0.05).结论:miR-4476可能是FOXP4的调控分子,其高表达可能与LSCC的发生和发展相关.上调或下调miR-4476表达可以增强或抑制喉癌细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力.

关键词：喉肿瘤、微RNAs、叉头转录因子类、miR-4476、FOXP4、生物学行为

所属期刊栏目：40

分类号：R739.65(肿瘤学)

资助基金：河北省医学科学研究重点课题;河北省医学科学研究重点课题

在线出版日期：2020-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：602-613