β-抑制蛋白1通过促进IL-6基因启动子区乙酰化调控非小细胞肺癌的细胞增殖和凋亡

摘要：

目的:探讨β-抑制蛋白1(β-arrestin 1,ARRB1)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响,并研究其可能的分子作用机制.方法:在非小细胞肺癌细胞系A549和H1650中,通过转染小干扰RNA的方法敲低ARRB1基因表达,或通过转入Flag标签的ARRB1基因重组质粒使ARRB1基因过表达,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证转染效果.采用实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测干扰和过表达ARRB1对白细胞介素6(interleukin-6,IL-6) mRNA转录和分泌水平的影响.采用蛋白免疫共沉淀法检测ARRB1与IL-6关键调控分子p300的相互作用.采用染色质免疫共沉淀法检测干扰或过表达ARRB1对IL-6基因启动子区p300富集和组蛋白乙酰化修饰的影响.采用CCK-8法和FCM法分别检测干扰ARRB1表达对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响.采用蛋白质印迹检测干扰或过表达ARRB1对IL-6/信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路相关分子活化和表达的影响.结果:在非小细胞肺癌细胞系A549和H1650中有效敲低或过表达ARRB1后发现,ARRB1可促进IL-6的转录和分泌(P值均＜0.05);正向和反向蛋白免疫共沉淀均检测到ARRB1与p300相互作用;同时发现ARRB1能促进p300在IL-6基因启动子区的富集(P值均＜0.01),提高IL-6基因启动子区的乙酰化水平(P值均＜ 0.05),促进非小细胞肺癌细胞增殖(P值均＜0.01),抑制细胞凋亡.另外,ARRB1能提高STAT3磷酸化活化水平以及c-Myc和Bcl-2的表达水平.结论:在非小细胞肺癌细胞中,ARRB1能够与p300相互作用,并促进p300向IL-6基因启动子区募集,从而提高IL-6基因启动子区组蛋白H3和H4的乙酰化水平,诱导IL-6的转录活化和分泌,并进一步触发IL-6/STAT3信号通路转导,提高STAT3磷酸化活化水平,使下游c-Myc和Bcl-2表达量增加,从而促进细胞增殖并抑制细胞凋亡.

关键词：癌、非小细胞肺、β-抑制蛋白1、白细胞介素6、乙酰化作用、信号转导及转录激活因子3

所属期刊栏目：40

分类号：R730.26(肿瘤学)

在线出版日期：2020-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：329-338