沉默EFNA3基因表达抑制缺氧诱导的肝细胞癌细胞的迁移与侵袭

摘要：

目的:探讨肝细胞癌中缺氧对肝配蛋白A3(ephrin A3,EFNA3)的调控作用,以及沉默EFNA3基因表达对缺氧诱导的肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响.方法:肝细胞癌HCC-LY10和MHCC-97L细胞缺氧条件下培养0、12、24和48 h,采用实时荧光定量PCR法检测2株细胞中EFNA3 mRNA和长链非编码RNA (long non-coding RNA,LncRNA) EFNA3的表达水平,蛋白质印迹法检测EFNA3和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白的表达水平.采用脂质体法将miR-210-3p-mimic和阴性对照(NC-mimic)转入HCC-LY10和MHCC-97L细胞,实时荧光定量PCR检测miR-210-3p的转染效率,以及miR-210-3p过表达后常氧和缺氧条件下EFNA3 mRNA和LncRNA EFNA3表达水平的变化,同时采用蛋白质印迹法检测HIF-1α和EFNA3蛋白表达水平的变化.采用慢病毒感染法将靶向HIF-1α和HIF-2α基因的shRNA慢病毒重组载体GV248-shHIF-1α-1、GV248-shHIF-1α-2、GV248-shHIF-2α-1和GV248-shHIF-2α-2及阴性对照GV248-NC转入HCC-LY10和MHCC-97L细胞,实时荧光定量PCR检测HIF-1α和HIF-2α的干扰效率,以及沉默HIF-1α和HIF-2α表达后缺氧条件下EFNA3 mRNA和LncRNA EFNA3表达水平的变化;采用慢病毒感染法将靶向EFNA3基因的shRNA重组慢病毒载体LVRU6GP-shEFNA3-1和LVRU6GP-shEFNA3-2及阴性对照LVRU6GP-NC转入HCC-LY10和MHCC-97L细胞,采用蛋白质印迹法检测EFNA3基因的干扰效率,Transwell小室法检测沉默EFNA3表达后缺氧条件下对肝细胞癌细胞HCC-LY10和MHCC-97L迁移和侵袭的影响.结果:在缺氧培养条件下,肝细胞癌HCC-LY10和MHCC-97L细胞中EFNA3 mRNA的表达水平无明显变化(P值均＞0.05),LncRNA EFNA3和EFNA3蛋白的表达水平均明显上调(P值均＜0.01);HCC-LY10和MHCC-97L细胞中稳定转染miR-210-3p mimic后,miR-210-3p 的表达水平显著增加(P值均＜ 0.001),miR-210-3p对EFNA3 mRNA和LncRNA EFNA3的表达无明显影响(P值均＞0.05),但能够下调缺氧诱导的EFNA3蛋白表达水平(P值均＜0.05);缺氧条件下在HCC-LY1O和MHCC-97L细胞中稳定干扰HIF-1α和HIF-2α表达后,HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA的表达水平均明显下调(P值均＜ 0.01);稳定干扰HIF-1α表达后对EFNA3 mRNA的表达无明显影响(P值均＞ 0.05),稳定干扰HIF-1α表达可下调LncRNA EFNA3的表达水平(P值均＜0.001);稳定干扰HIF-2α对EFNA3 mRNA和LncRNA EFNA3的表达水平均无明显影响(P值均＞0.05);稳定干扰EFNA3表达后显著抑制缺氧诱导的HCC-LY10和MHCC-97L细胞的迁移和侵袭能力的增加(P值均＜0.01).结论:缺氧条件下,HIF-1α可上调LncRNA EFNA3的水平,竞争性结合miR-210-3p,从而上调EFNA3蛋白的表达水平,干扰EFNA3的表达能抑制肝细胞癌细胞的迁移和侵袭能力.

关键词：癌、肝细胞、低氧、竞争内源性RNA、细胞运动

所属期刊栏目：40

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;上海市卫生计生系统优秀学科带头人培养计划

在线出版日期：2020-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：305-316