沉默GTSE1基因通过p53通路诱导肝癌细胞凋亡

摘要：

目的:验证G2/S期应答相关蛋白1(G2 and S phase-expressed protein 1,GTSE1)在原发性肝癌组织及细胞株中高表达,并探讨其表达下调对肝癌细胞凋亡的影响.方法:采用内置R程序对GEO (Gene Expression Omnibus)数据库中4项原发性肝癌临床研究的基因表达矩阵数据进行分析,筛选肝癌与癌旁组织差异表达基因.采用蛋白质印迹法验证3例肝癌组织和3株肝癌细胞中GTSE1蛋白表达水平.向肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞中分别转染GTSE1 siRNA后,采用CCK-8和FCM法分别检测GTSE1表达下调对肝癌细胞增殖、凋亡及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)敏感性的影响,进一步采用蛋白质印迹法检测p53含量及其亚细胞定位,以及Bcl-2家族成员的表达变化.结果:4项研究中原发性肝癌组织表达水平均上调和下调的基因分别为51和146个.其中,上调基因产物GTSE1蛋白在3例临床肝癌组织标本和3株肝癌细胞Hep-G2、Bel-7402和SMMC-7721中均得到进一步验证(P值均＜ 0.001).siRNA转染后,肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞中GTSE1基因沉默效率＞70％.与对照组相比,GTSE1表达下调后肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞增殖被明显抑制,并随着时间延长,抑制作用逐渐增强(P值均＜ 0.05);GTSE1表达下调后肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞周期被阻滞在G1期,同时细胞凋亡率明显升高,且细胞对5-FU的敏感性明显增强(P值均＜ 0.01).GTSE1表达下调后的肝癌Hep-G2和Bel-7402细胞中总p53及磷酸化p53表达水平均明显上调(P值均＜0.05),且细胞核内p53水平升高(P值均＜ 0.01);Bcl-2家族促凋亡成员Bax和Bak表达水平均上调,而抗凋亡成员Bcl-2表达水平下调(P值均＜0.05).结论:下调肝癌中GTSE1蛋白表达能通过活化p53通路促进细胞凋亡,并增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性.

关键词：肝肿瘤、RNA干扰、基因、p53、细胞凋亡、G2和S期应答相关蛋白1

所属期刊栏目：40

分类号：R735.7(肿瘤学)

在线出版日期：2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：113-121