AKT通过C-myc通路调控肝癌HepG2细胞中PTEN蛋白的表达

摘要：

目的:探讨C-myc是否参与肝肿瘤HepG2细胞内蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)对第10号染色体同源丢失性磷酸酶基因和张力蛋白(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)表达的调控.方法:HepG2细胞经不同浓度的AKT抑制剂Capivasertib(5、10及20nmol/L)处理后,采用蛋白质印迹法检测AKT、C-myc和Bad及其磷酸化蛋白的表达情况;实时荧光定量PCR法检测对C-myc下游真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)、支链氨基酸氨基转移酶1(branched-chain amino acid aminotransferase 1,BCAT1)及WW结构域E3泛素连接酶1(WW domain-containing E3 ubiquitin protein ligase 1,WWP1)基因转录活性的影响.采用siRNA法沉默HepG2细胞中eIF-4E、BCAT1及WWP1基因的表达,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测沉默eIF-4E、BCAT1及WWP1基因表达对PTEN转录和蛋白表达水平的影响;细胞荧光免疫法检测Capivasertib或沉默WWP1基因表达对PTEN在HepG-2细胞中表达和定位的影响.结果:HepG2细胞经不同浓度的Capivasertib处理8h后,磷酸化-AKT(phospho-AKT,p-AKT)、p-C-myc和p-Bad蛋白的表达水平均较对照组明显下调(P值均＜ 0.01),C-myc调控的下游基因eIF-4E、BCAT1及WWP1 mRNA的表达水平均明显下调(P值均＜0.01).沉默eIF-4E、BCAT1及WWP1基因表达,对PTEN mRNA的表达均没有明显影响(P值均＞ 0.05),但沉默WWP1基因表达可使PTEN蛋白的表达水平明显上调(P＜0.01).细胞荧光免疫实验进一步证实,沉默WWP1基因表达与Capivasertib作用均可增强PTEN在HepG2细胞中的表达水平并使其在细胞膜上聚集.结论:AKT能通过C-myc信号途径影响WWP1基因的转录水平,进而实现对HepG2细胞中PTEN表达的调控.

关键词：肝肿瘤、实验性、AKT信号通路、原癌基因蛋白质c-myc、PTEN

所属期刊栏目：40

分类号：R735.7(肿瘤学)

在线出版日期：2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：102-112