稳定干扰癌相关成纤维细胞中YAP1表达可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭

摘要：

目的:探讨稳定干扰癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)中Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响.方法:用生物信息学方法分析乳腺原代CAF与对应正常成纤维细胞(normal fibroblast,NF)的mRNA芯片数据中YAP1的表达,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测乳腺原代及永生化CAF与NF细胞中YAP1 mRNA和蛋白的表达水平,以验证芯片结果的真实性和准确性.用NF与CAF条件培养液分别培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,然后采用Transwell小室法比较NF与CAF对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响.构建靶向YAP1基因的shRNA重组质粒并转染入CAF,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测CAF细胞中YAP1 mRNA和蛋白的表达水平,然后采用划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测干扰YAP1表达后的CAF条件培养液对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响.用Hippo通路抑制剂XMU-MP-1处理CAF,采用蛋白质印迹法检测CAF细胞中YAP1总蛋白和磷酸化蛋白水平,Transwell小室法检测XMU-MP-1处理后的CAF条件培养液对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响.采用实时荧光定量PCR法检测干扰YAP1表达后的CAF细胞中YAP1下游与迁移和侵袭密切相关的转化因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)和白细胞介素6 (interleukin 6,IL6)的表达,并采用Collagen Ⅰ胶原凝胶收缩实验检测干扰YAP1表达对细胞外基质重塑的影响.结果:mRNA芯片检测发现,与正常对照NF相比,乳腺原代CAF中YAP1高表达(P＜0.05).实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测证实原代及永生化CAF中YAP1 mRNA (P＜0.05)和蛋白(P＜0.01)水平均明显高于NF.与NF相比较,CAF条件培养液可明显促进乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭(P＜0.01).成功构建YAP1 shRNA稳定转染的CAF细胞株,其中YAP1 mRNA和蛋白表达水平均明显下调(P值均＜ 0.01).与未干扰YAP1表达的CAF对照组相比,经稳定干扰YAP1的CAF条件培养液处理后,乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移(P＜0.05)和侵袭(P＜0.01)能力均明显减弱.用Hippo通路抑制剂XMU-MP-1处理后,CAF细胞中YAP1磷酸化蛋白水平明显降低(P＜0.01),经该CAF条件培养液处理后MDA-MB-231细胞的侵袭能力明显增强(P＜0.05).干扰YAP1表达后的CAF细胞中TGF-β1和IL6 mRNA表达水平均明显下调(P值均＜ 0.05),且细胞外基质的胶原凝胶收缩能力明显减弱(P＜0.05).结论:稳定干扰CAF细胞中YAP1表达可能通过下调细胞因子TGF-β1和IL6的表达,以及重塑细胞外基质,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭.

关键词：乳腺肿瘤、癌相关成纤维细胞、RNA、小分子干扰、细胞外基质、肿瘤侵润、细胞迁移分析、Yes相关蛋白1

所属期刊栏目：39

分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2019-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：863-873,896