沉默ACLY基因可抑制结肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭

摘要：

目的:探讨沉默ATP柠檬酸裂解酶(ATP citrate lyase,ACLY)基因表达对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的抑制作用.方法:采用成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)技术特异性靶向ACLY基因,构建2株稳定沉默ACLY表达的结肠癌HCT116细胞(即ACLY-knockout-1和ACLY-knockout-2,简称KO-1和KO-2).应用蛋白质印迹法检测KO-1和KO-2组及未敲除ACLY的对照组(Ctrl) HCT116细胞中ACLY蛋白的表达,应用CCK-8法和软琼脂克隆形成实验分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的迁移和侵袭能力,应用实时荧光定量PCR法检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子E-cadhrein、N-cadherin和波形蛋白(vimentin,VIM)以及相关转录因子Snail和锌指E盒增强子结合蛋白1(zinc-finger E-box binding homeobox1,ZEB1) mRNA的表达水平.结果:KO-1和KO-2组HCT116细胞中ACLY蛋白不能正常表达,而Ctrl组HCT116细胞中可见ACLY蛋白表达.细胞培养72和96 h,KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力明显低于Ctrl组(P值均＜0.01);KO-1组HCT116细胞形成的克隆数显著少于Ctrl组(P＜0.01).KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞的迁移(P值均＜0.05)和侵袭(P值均＜0.01)能力均低于Ctrl组.KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子N-cadherin和VIM以及相关转录因子Snail和ZEB1 mRNA的表达水平均明显低于Ctrl组(P值均＜0.01),E-cadherin mRNA的表达水平均明显高于Ctrl组(P值均＜0.01).结论:沉默ACLY基因可能逆转结肠癌HCT116细胞的上皮-间质转化,显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖和迁移.

关键词：结直肠肿瘤、细胞迁移分析、肿瘤侵润、上皮-间质转化、ACLY基因、成簇规律间隔的短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9

所属期刊栏目：39

分类号：R737.33;R378.22;O737.31

在线出版日期：2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：460-468