CD44v16通过细胞自噬途径增强乳腺癌MCF7细胞的化疗耐药性

摘要：

目的:探讨一种新的CD44剪切变异体16 (CD44 variant 16,CD44v16)对乳腺癌细胞多柔比星(doxorubicin,DOX)耐药性的影响及其机制.方法:利用慢病毒感染法构建CD44v16过表达的MCF7细胞株(命名为MCF7-CD44v16),以及CD44v16基因沉默的MCF7/DOX细胞株(命名为MCF7/DOX-shCD44v16).采用CCK-8法检测DOX对各组细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),以及在相同浓度DOX处理后细胞的生长情况.采用罗丹明潴留实验检测各组细胞中罗丹明潴留率.采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中乳腺癌耐药相关基因的表达变化.采用蛋白质印迹法检测各组细胞中自噬相关蛋白的表达水平.用自噬抑制剂氯喹(30 nmol/L)处理各组细胞后,再次采用CCK-8和实时荧光定量PCR法分别检测各组细胞的DOX IC50值和耐药相关基因的表达变化.结果:成功构建慢病毒稳定感染的MCF7-CD44v16和MCF7/DOX-shCD44v16细胞株.DOX对各组细胞的IC5o值存在明显差异(P＜0.05).DOX作用下MCF7-CD44v16细胞生长活性较MCF7细胞高(P＜0.05),相反MCF7/DOX-shCD44v16细胞生长活性较MCF7/DOX细胞低(P＜0.05).MCF7-CD44v16细胞中罗丹明平均荧光强度低于MCF7细胞(P＜0.05),而MCF7/DOX-shCD44v16细胞中罗丹明潴留率高于MCF7/DOX细胞(P＜0.05).与对照组MCF7细胞相比,MCF7-CD44v16细胞中CD44v16过表达,多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)和切除修复交叉互补基因1 (excision repair cross-complementing gene 1,ERCC1)的mRNA表达水平明显上调(P值均＜0.01),微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3 Ⅱ,LC3 Ⅱ)及Bcl-2同源结构域蛋白1(Beclin-1)表达水平也明显升高(P值均＜0.01);而与对照组MCF7/DOX细胞株相比,MCF7/DOX-shCD44v16细胞株中CD44v16表达下调后,MRP1、LRP、ERCC1、谷胱甘肽-S-转移酶π亚型(glutathione-S-transporter-π,GST-π)及多药耐药基因1(multidrugresistance 1,MDR1)的mRNA表达水平明显降低(P值均＜0.01),且LC3 Ⅱ和Beclin-1蛋白表达水平也明显下调(P值均＜0.05).与未加氯喹的对照组细胞相比,自噬抑制剂氯喹处理后各组细胞的IC5o值均有所下降(P值均＜ 0.05),耐药相关基因MRP1、LRP和ERCC1的表达水平也明显降低(P值均＜0.05).结论:CD44v16能够增强乳腺癌细胞对化疗药物DOX的耐药性,其机制可能与促进细胞自噬有关.

关键词：乳腺肿瘤、抗药性、肿瘤、自噬、多药耐药相关蛋白质类、CD44v16

所属期刊栏目：39

分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81672913

在线出版日期：2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：439-449