淋巴瘤细胞来源性的外泌体对人淋巴瘤细胞恶性生物学行为的影响

摘要：

目的:观察淋巴瘤细胞来源的外泌体对淋巴瘤细胞株增殖、耐药、迁移及侵袭能力的影响.方法:诱导建立对多柔比星(doxorubicin,DOX)耐药的弥漫大B细胞淋巴瘤Su-DHL-4/DOX细胞及Burkitt淋巴瘤Raji/DOX细胞.应用商品化试剂盒Total Exosome Isolation(from cell culture media)从亲本Su-DHL-4和Raji细胞以及耐药Su-DHL-4/DOX和Raji/DOX细胞的培养上清液中分离提取外泌体(分别命名为Su-EXO、Raji-EXO、Su/DOX-EXO及Raji/DOX-EXO).用透射电子显微镜观察提取获得的外泌体的形态及大小,采用蛋白质印迹法检测外泌体表面标志蛋白凋亡相关基因-2(apoptosis-linked gene-2,ALG-2)相互作用蛋白X (ALG-2 interacting protein-X,ALIX)和肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)的表达,以及纳米颗粒跟踪分析仪Zetaview检测外泌体粒径.将不同浓度的外泌体(Su-EXO和Raji-EXO)与其亲本Su-DHL-4和RRaji细胞共培养后,应用锥虫蓝拒染法绘制细胞增殖曲线;不同浓度的Su-EXO、Raji-EXO以及Su/DOX-EXO(40 μg/mL)和Raji/]DOX-EXO(40 μg/mL)与亲本Su-DHL-4和Raji细胞共培养后,CCK-8法检测DOX对淋巴瘤细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),Transwell小室法检测淋巴瘤细胞的迁移和侵袭能力.结果:成功建立对DOX耐药的Su-DHL-4/DOX和Raji/DOX细胞株.透射电子显微镜下观察结果显示,分离获得的外泌体呈典型的茶托样、双层膜囊泡结构,且大小均一.蛋白质印迹法结果显示,分离获得的外泌体上有外泌体标志蛋白ALIX及TSG101的表达;Zetaview粒径分析结果显示,所提取的外泌体粒径均在30～150nm之内.Su-DHL-4和Raji细胞与其各自来源的外泌体Su-EXO和Raji-EXO共培养后,细胞增殖能力均显著增强(P值均＜0.01).Su-DHL-4细胞与其DOX耐药Su-DHL-4/DOX细胞株来源的外泌体Su/DOX-EXO共培养后,Su-DHL-4细胞对的DOX敏感性显著降低(P＜0.01).Su-EXO和Raji-EXO能显著增强淋巴瘤细胞株Su-DHL-4与Raji细胞的迁移(P＜0.05和P＜ 0.001)和侵袭(P＜0.05和P＜0.01)能力.结论:淋巴瘤细胞来源性外泌体能促进淋巴瘤细胞增殖,降低其对化疗药物DOX的敏感性,并增强其迁移及侵袭能力.

关键词：淋巴瘤、外泌体、细胞增殖、抗药性、肿瘤、细胞运动

所属期刊栏目：39

分类号：R733.4(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81570177

在线出版日期：2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：427-438