微RNA-129-5p下调PAK5表达并调控骨肉瘤细胞增殖和凋亡

摘要：

目的:探讨微RNA-129-5p(microRNA-129-5p,miR-129-5p)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,以及其可能的分子作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤细胞MG63和成骨细胞hFOB1.19中miR-129-5p表达的差异.将miR-129-5p模拟物转染至骨肉瘤MG63细胞,并采用实时荧光定量PCR法验证转染效率后,CCK-8和平板克隆形成实验检测骨肉瘤细胞增殖;FCM法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-129-5p和靶基因p21活化激酶5(p21-activated kinase 5,PAK5)的相互作用;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测 PAK5 mRNA和蛋白水平的变化;蛋白质印迹法检测磷酸化糖原合成酶激酶3β(phospho-glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)和p-连环蛋白(β-catenin)表达水平的变化.将siRNA-PAK5、PAK5重组质粒以及miR-129-5p mimics+PAK5重组质粒分别转染骨肉瘤MG63细胞后,采用上述方法进一步验证miR-129-5p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的分子作用机制.结果:miR-129-5p在骨肉瘤MG63细胞中低表达(P＜0.05).转染miR-129-5p模拟物后,骨肉瘤细胞的增殖和克隆形成能力降低(P＜0.001,P＜ 0.01),而细胞凋亡率升高(P＜0.05).miR-129-5p负性调控PAK5基因表达(P＜0.05).转染miR-129-5p模拟物或siRNA-PAK5后,PAK5mRNA和蛋白表达水平明显降低(P值均＜0.01),而且p-GSK-3β和β-catenin蛋白表达水平也明显降低(P＜0.05,P＜0.01);而过表达PAK5可以恢复miR-129-5p对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响(P值均＜0.05).结论:miR-129-5p通过下调PAK5基因表达,抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡;其作用机制可能与调控p-GSK-3β和β-catenin蛋白表达相关.

关键词：骨肉瘤、微RNAs、p21活化激酶类、基因表达调控、miR-129-5p、PAK5

所属期刊栏目：39

分类号：R738.1(肿瘤学)

资助基金：种子基金;上海市卫生计生委科研项目

在线出版日期：2019-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：99-106,115