前列腺癌细胞中TNS4新突变体及其作用机制初探

摘要：

目的:检测前列腺癌细胞中张力蛋白家族第四成员(tensin family member 4,TNS4)基因的表达和突变情况,并探讨其潜在的作用机制.方法:采用RT-PCR法分析多种前列腺癌细胞中TNS4基因表达;并扩增TNS4基因的全长cDNA,进行限制性核酸内切酶水解和DNA测序分析.构建TNS4基因野生型和突变体重组质粒,转染前列腺癌PC-3细胞,然后采用RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光染色法分别测定野生型和突变体TNS4过表达对信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)mRNA、蛋白表达及定位的影响.结果:与良性前列腺增生细胞BPH1相比,前列腺癌DU145、LNCaP和22Rv1细胞中TNS4基因呈低表达(P值均＜0.01),而前列腺癌PC-3细胞中几乎没有TNS4基因表达.分析TNS4基因的全长cDNA序列后发现,前列腺癌DU145和LNCaP细胞中TNS4基因存在突变位点T427C和G1455A,其中T427C突变导致对应氨基酸构成发生转变(S143P).成功构建TNS4基因突变体重组质粒pcDNA3.1(+)-TNS4-Mut和野生型TNS4基因重组质粒pcDNA3.1(+)-TNS4-WT并转染前列腺癌PC-3细胞后,TNS4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P值均＜0.05),STAT1基因转录水平未见明显变化(P＞0.05),但STAT1蛋白表达水平明显升高(P值均＜ 0.05),而且TNS4基因突变体过表达能够明显促进STAT1蛋白进入细胞核(P＜0.01).结论:前列腺癌细胞中TNS4基因明显低表达,且存在新的TNS4突变体(S143P);过表达TNS4能够上调STAT1蛋白的表达水平,而且TNS4突变体过表达会进一步改变STAT1蛋白的细胞定位.

关键词：前列腺肿瘤、基因表达、点突变、张力蛋白家族第四成员、信号转导与转录激活因子

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分类号：R737.25(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目编号:81172007,81472415National Natural Science Foundation of China 81172007,81472415

在线出版日期：2018-04-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

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