睡美人转座子介导AEG1基因修饰的树突状细胞可治疗小鼠肝癌

摘要：

目的:探讨睡美人(Sleeping Bbeauty,SB)转座子系统转染树突状细胞(dendritic cells,DCs)的效率,以及星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene 1,AEG1)重组转座子系统转染DCs对小鼠肝癌的抑制作用.方法:从pEGFP-N1质粒中获取巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因,从小鼠肝癌细胞H22中克隆AEG1基因,将上述基因分别插入质粒pT/HB后获得重组转座子载体pT-CMV-EGFP和pT-CMV-AEG1.将重组转座子载体分别与转座酶pCMV-SB11按一定比例混合后获得双质粒转座子系统pT-CMV-EGFP/SB11和pT-CMV-AEG1/SB11.将pT-CMV-EGFP/SB11转染DCs,荧光显微镜和FCM法观察EGFP表达率;将pT-CMV-AEG1/SB11转染DCs后,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测AEG1 mRNA和蛋白的表达.用pT-CMV-AEG1/SB 11转染后的DCs治疗肝癌H22细胞荷瘤小鼠,观察小鼠体内肿瘤体积的变化,并采用乳酸脱氢酶释放法检测治疗19d后小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性.结果:经质粒酶切和基因测序证实,重组转座子载体pT-CMV-EGFP和pT-CMV-AEG1均构建成功.pT-CMV-EGFP/SB11转染DCs后24和48 h,细胞内EGFP的表达率分别为46.5％和27.8％,均明显高于空载体pT-CMV/SB11转染组(P值均＜0.001).pT-CMV-AEG1/SB11转染DCs后24 h,细胞内AEG1 mRNA和蛋白表达水平均高于空载体pT-CMV/SB11转染组(P值均＜ 0.001).用pT-CMV-AEG1/SB11转染的DCs治疗H22荷瘤小鼠后,小鼠体内肿瘤生长被明显抑制(P＜0.01),小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性明显增强(P＜0.01).结论:SB转座子系统可高效转染DCs.pT-CMV-AEG1/SB11转染的DCs可通过诱导特异性细胞免疫,抑制H22细胞荷瘤小鼠的肿瘤生长.

关键词：肝肿瘤、实验性、DNA转座子、基因治疗、树突细胞、小鼠、近交BALB/c

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分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：云南省应用基础研究-昆医联合专项编号:2013FZ290;Yunnan Applied Basic Research Project-Joint Special Project No.2013FZ290

在线出版日期：2016-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：723-731