沉默HOXA10基因表达联合川芎嗪可逆转K562/ADR细胞的多药耐药性

摘要：

目的:研究靶向沉默人慢性髓系白血病耐多柔比星(adriamycin,ADR)细胞株K562/ADR中同源盒A10 (homebox A10,HOXA10)基因表达后联合川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对逆转K562/ADR细胞多药耐药性的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用脂质体法将构建有靶向HOXA10基因的shRNA重组表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10-shRNA稳定转入K562/ADR细胞中,分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测对HOXA10 mRNA和蛋白表达的影响.实验分为6组:空白对照组、阴性对照-shRNA(negative controlshRNA,NC-shRNA) 组、HOXA10-shRNA组、TMP单药组、NC-shRNA+TMP(2μg/mL)组和HOXA10-shRNA+TMP (2μg/mL)组.采用MTT法检测各组细胞的逆转耐药倍数.FCM法检测细胞内ADR平均荧光强度的变化;蛋白质印迹法检测细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)的表达.结果:pGPHI/GFP/Neo-HOXA10-shRNA表达载体能有效抑制K562/ADR细胞中HOXA10 mRNA及蛋白的表达.HOXA10-shRNA+TMP(2 μg/mL)组K562/ADR细胞对ADR的逆转耐药倍数为5.08倍,均较HOXA10-shRNA组和TMP单药组提高(P值均＜0.05);细胞内ADR的平均荧光强度均较HOXA10-shRNA组和TMP单药组提高(P值均＜0.05);P-gp和MRP1的表达水平均较HOXA10-shRNA组和TMP单药组明显下调(P值均＜0.05).结论:靶向沉默HOXA10基因表达联合TMP能逆转K562/ADR细胞的多药耐药,两者间有协同作用,可为临床逆转白血病多药耐药提供重要的实验依据.

关键词：白血病、抗药性、多药、RNA、小分子干扰、川芎嗪、HOXA10基因

所属期刊栏目：36

分类号：R733.7(肿瘤学)

在线出版日期：2016-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：635-643