siRNA抑制Mcl-1基因表达对TRAIL诱导的人胃腺癌SGC7901/ADR细胞凋亡的影响

摘要：

目的:研究沉默髓样细胞白血病1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)基因表达对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导人胃腺癌耐多柔比星(adriamycin,ADR) SGC7901/ADR细胞凋亡的影响,并探讨胃癌耐药细胞株耐TRAIL凋亡效应的可能机制.方法:不同质量浓度的TRAIL(10、50和100 ng/mL)处理SGC7901/ADR细胞后,采用MTT法和FCM法分别检测细胞活力和细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测SGC7901/ADR细胞中Mcl-1 mRNA和蛋白的表达水平.采用脂质体转染法将Mcl-1-siRNA转染至SGC7901/ADR细胞,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测Mcl-1-siRNA对Mcl-1 mRNA及蛋白表达水平的影响.采用TRAIL (50 ng/mL)处理Mcl-1基因沉默后的SGC7901/ADR细胞,MTT法和FCM法分别检测Mcl-1基因沉默后TRAIL对细胞增殖及凋亡率的影响,并进一步用蛋白质印迹法检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt C)的表达水平以及凋亡相关蛋白caspase 3和caspase 9的激活情况.结果:不同质量浓度的TRAIL(10、50和100 ng/mL)均能抑制人胃腺癌耐药株SGC7901/ADR细胞的增殖,并诱导其凋亡(P值均＜0.05),但敏感性较低;TRAIL能明显提高SGC7901/ADR细胞中Mcl-1mRNA(P值均＜0.001)和蛋白(P值均＜0.05)的表达水平.Mcl-1-siRNA转染后,SGC7901/ADR细胞中Mcl-1 mRNA和蛋白表达均明显下调(P值均＜ 0.001).与阴性对照组(转染阴性对照-siRNA+TRAIL)相比,Mcl-1-siRNA转染后联合应用TRAIL组SGC7901/ADR细胞的增殖能力明显下降(P＜0.001),细胞凋亡率明显增加(P＜0.001),Cyt C、active-caspase 3和active-caspase 9蛋白的表达水平均明显增加(P值均＜0.001).结论:TRAIL能上调胃癌耐药细胞株中抗凋亡蛋白Mcl-1表达,siRNA抑制Mcl-1表达可增强TRAIL对SGC7901/ADR细胞的致凋亡作用,提示胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR耐TRAIL致凋亡效应可能与Mcl-1高表达有关.

关键词：胃肿瘤、TNF相关凋亡诱导配体、髓样细胞白血病-1、细胞凋亡、抗药性、肿瘤

所属期刊栏目：36

分类号：R735.2(肿瘤学)

资助基金：安徽省自然科学基金资助项目编号:1308085MH167;Natural Science Foundation of Anhui Province No.1308085MH167

在线出版日期：2016-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：254-263