微RNA-375通过抑制YAP基因表达调控CIK细胞对宫颈癌SiHa细胞的体外杀伤效应

摘要：

目的:探讨微RNA-375(microRNA-375,miR-375)参与细胞因子诱导杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞杀伤宫颈癌SiHa细胞过程的调控作用,并确定miR-375发挥功能的靶基因及其分子机制.方法:分离健康者外周血单个核细胞,在体外用多种细胞因子培养14 d后诱导成CIK细胞.收集CIK细胞作为效应细胞,FCM法分析其表型特征,并采用CCK-8法测定CIK细胞对宫颈癌SiHa细胞的杀伤效应.实时荧光定量PCR法检测与CIK细胞共培养前后宫颈癌SiHa细胞中miR-375的表达水平.CCK-8法检测miR-375模拟物转染后SiHa细胞的活性变化,以及CIK细胞共培养对转染miR-375抑制子后SiHa细胞的生长抑制作用.细胞免疫荧光法和蛋白质印迹法检测与CIK细胞共培养后,转染miR-375抑制子的SiHa细胞中Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)的表达情况.结果:与CIK细胞共培养24、48和72 h后,SiHa细胞的生长抑制率分别为(22.97±3.54)％、(37.48±3.64)％和l(54.32±4.25)％,SiHa细胞中miR-375的相对表达量分别约为共培养前的1.39、1.57和2.68倍.转染miR-375模拟物后,SiHa细胞的活性显著降低(P＜0.001).转染miR-375抑制子后,CIK细胞抑制SiHa细胞生长的效应显著降低(P＜0.001).YAP蛋白在SiHa细胞中大量表达,且主要集中于细胞核.与CIK细胞共培养后,转染miR-375抑制子的SiHa细胞中YAP蛋白表达显著上调(P＜0.01).结论:CIK可有效杀伤宫颈癌SiHa细胞.miR-375作为一种抑癌因子,在CIK细胞杀伤宫颈癌SiHa细胞过程中可能通过下调YAP基因的表达来发挥作用.

关键词：子宫颈肿瘤、细胞因子诱导杀伤细胞、微RNAs、基因表达调控、MiRNA-375、Yes相关蛋白

所属期刊栏目：36

分类号：R737.33(肿瘤学)

在线出版日期：2016-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：43-51