UHRF1基因沉默对逆转人肺腺癌A549细胞顺铂耐药性的影响

摘要：

目的:检测泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like with PHD and ringfinger domain 1,UHRF1)基因在人肺腺癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中的表达差异,并探讨沉默UHRF1基因对逆转A549/DDP细胞对DDP耐药性的影响.方法:采用半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测UHRF1 mRNA和蛋白在A549及A549/DDP细胞中的表达差异.随后构建靶向沉默UHRF1基因的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,并采用慢病毒感染法感染至A549/DDP细胞,同时设未进行感染的空白对照组和感染非特异性shRNA的阴性对照组.采用蛋白质印迹法检测各组细胞中UHRF1蛋白的表达水平.采用MTT法检测各组细胞在DDP作用下的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50).采用FCM法检测细胞凋亡率.采用蛋白质印迹法检测凋亡调节因子Bcl-2和Bax的表达情况.结果:UHRF1 mRNA和蛋白在A549/DDP细胞中的表达水平显著高于亲代A549细胞(P＜0.01).靶向UHRF1基因的shRNA明显下调A549/DDP细胞中UHRF1蛋白的表达水平(P＜0.01).在不同浓度DDP作用24 h后,UHRF1-shRNA组A549/DDP细胞的IC50值明显低于空白对照组和阴性对照组,对DDP的敏感性显著提高(P值均＜0.01).DDP(6 mg/L)作用24 h后,UHRF1-shRNA组细胞的凋亡率及促凋亡蛋白Bax的表达水平较空白对照组和阴性对照组明显增高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平则明显下调(P值均＜ 0.01).结论:UHRF1基因在人耐药肺腺癌细胞中呈现高表达,提示UHRF1参与肺腺癌耐药的形成;UHRF1-shRNA可特异性下调UHRF1的表达,逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,并通过调节凋亡相关基因的表达促进其凋亡.UHRF1基因可能成为逆转肺癌耐药性的一个新的分子靶点.

关键词：癌、非小细胞肺、抗药性、RNA干扰、UHRF1基因

所属期刊栏目：35

分类号：R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：834-841